As histórias nesta série animada tendem a dar mais foco para os antagonistas do Batman, que incluem os personagens Robin, Asa Noturna e Batgirl, entre outros. Os episódios apresentam também estrelas convidadas como Supergirl, Etrigan e Rastejante; personagens que mais tarde apareceria com Batman em Liga da Justiça e Liga da Justiça Sem Limites.
Dois anos se passaram após após o fim da série Batman: A Série Animada em Gotham City,e Batman continua sua cruzada contra o crime. Dick Grayson, por conta de divergências com Batman, assume a alcunha de Asa Noturna, e passa a agir por conta própria. Um novo Robin surge na pele de Tim Drake, filho de um capanga de Duas-Caras. O Pinguim passa a ser dono de uma casa noturna, de onde passa a fazer negócios com comerciantes ilegais, tais como o Crocodilo, fazendo parte da máfia de Gotham. O Senhor Frio consegue finalmente ressuscitar sua falecida esposa Nora Fries. O Chapeleiro Louco recruta animais de circo para realizar seus crimes. Bruce Wayne se casa com uma misteriosa mulher, que conheceu no casamento de sua melhor amiga, Veronica Vreeland. Um pirotécnico amorosamente frustrado se transforma no vilão Vagalume. Arlequina se torna comparsa de Hera Venenosa, que possui uma coloração verde no corpo, e é revelado o início da sua idolatria pelo Coringa. Batman enfrenta Klarion, um garoto feiticeiro satanista, com o auxílio do demônio Etrigan. O Coringa faz com que o jornalista Jack Ryder se transforme no Rastejante, um excêntrico herói. Por fim, surge em Gotham um novo justiceiro(Duas Caras disfarçado), que vai capturando criminosos e os levando à justiça.
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