Afro Samurai se passa em um "Japão feudal futurístico" onde aquele que conseguir a bandana simbólica de "Número Um" irá comandar o mundo como um "deus". Entretanto, somente aquele que tiver a bandana de "Número Dois" tem direito de desafiar o Número Um. Por sua vez, qualquer um pode desafiar o Número Dois. Quando criança, Afro teve seu pai (que era o Número Um) assassinado bem em sua frente por um pistoleiro, "Justice" (antigo Número Dois) e com isso passou a ser o Número Um. Agora Adulto, Afro Samurai, é o atual Número Dois, e viaja pelo mundo em busca de vingança, pelo atual Número Um que matou seu pai.
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Quando o corpo de seu pai é roubado do túmulo, Afro retoma a sua espada novamente para destruir um exército de inimigos mortais liderados por um sádico.